三更半夜鬼闹房节目重点围绕艺人艺能的全面深度挖掘、流光溢彩的精品表演秀的创意呈现、最具热点的社会性话题输出等方面进行设计。何炅、冯禧担任主持人，檀健次、李雪琴、秦霄贤、王鹤棣、蔡文静、赵小棠、黄明昊等担任阶段性常驻嘉宾，每期会邀请几位飞行嘉宾参与录制，包括明星和各行各业的代表以及不同领域的艺术团体。节目内容由访谈、互动、秀等环节构成，全面展现嘉宾的专业素养，重新定义了以艺服人、以能动人的综艺准入门槛。